Condizioni di base per la coltura cellulare
1. Mezzo di coltura cellulare appropriato
Un mezzo di coltura cellulare adatto è una delle condizioni più importanti per la crescita e la proliferazione cellulare in vitro. Il mezzo di coltura non solo fornisce nutrimento cellulare e sostanze di base per promuovere la crescita e la proliferazione cellulare, ma fornisce anche un ambiente di vita per la crescita e la riproduzione delle cellule in coltura.
2. Siero di alta qualità
Attualmente, la maggior parte dei terreni sintetici richiede l'aggiunta di siero. Il siero è uno dei componenti più importanti nel mezzo di coltura cellulare, contenente una varietà di fattori di crescita e altri nutrienti necessari per la crescita cellulare.
3. Temperatura di crescita cellulare costante
Per mantenere la crescita vigorosa delle cellule in coltura, deve esserci una temperatura costante e appropriata.
4. Ambiente di gas adatto
Il gas è una delle condizioni necessarie per la sopravvivenza delle cellule dei mammiferi e i gas necessari sono principalmente ossigeno e anidride carbonica.
5. Temperatura della coltura cellulare
Per mantenere la crescita vigorosa delle cellule in coltura, deve esserci una temperatura costante e adeguata. Diversi tipi di cellule hanno requisiti diversi per la temperatura della coltura. La temperatura standard per la coltura cellulare umana è 36,5 gradi ± 0,5 gradi . La deviazione da questo intervallo di temperatura influenzerà il normale metabolismo delle cellule e persino la morte.
6. Ambiente di gas adatto
Il gas è una delle condizioni necessarie per la sopravvivenza della coltura cellulare dei mammiferi e i gas necessari sono principalmente ossigeno e anidride carbonica. L'ossigeno partecipa al ciclo dell'acido tricarbossilico, producendo energia per la crescita e la proliferazione cellulare e sintetizzando vari componenti necessari per la crescita cellulare.
Comune contaminazione della coltura cellulare
1. Contaminazione batterica
La contaminazione batterica è la più comune. Una volta che l'operazione è leggermente impropria, causerà la contaminazione delle cellule. Dopo la contaminazione batterica, se osservata al microscopio, apparirà come sottili strisce di sabbia nere. A forma di bastoncello, ecc. In secondo luogo, il mezzo di coltura diventa giallo e torbido e nella capsula di Petri si possono vedere chiaramente sedimenti a forma di sabbia fine e di tanto in tanto c'è uno strano odore.
2. Contaminazione fungina
La soluzione di coltura contaminata da funghi è chiara e trasparente, non come un grande focolaio di infezione batterica, quindi è difficile rilevarla precocemente. A volte sembra un filamento al microscopio, a volte sembra un corallo e lentamente crescerà un filamento nero molto sottile. Questo Quando è troppo tardi, è difficile salvare le cellule.
3. Contaminazione della muffa
Coerentemente con le infezioni fungine, poiché il mezzo di coltura è limpido, è difficile rilevare la contaminazione fungina precocemente, quando spesso è troppo tardi. Le impurità flocculanti sono apparse lentamente nel mezzo di coltura e al microscopio si potevano vedere oggetti galleggianti di massa filamentosa, come amenti nel vento. Le cellule possono ancora crescere, ma nel tempo le cellule si deteriorano e smettono di crescere.
4. Infezione da micoplasma
Il mezzo di coltura diventa torbido. Dopo che il micoplasma ha infettato le cellule, i cambiamenti citopatici non sono evidenti, ma lo stato cellulare peggiora e la crescita rallenta. Potrebbero essere presenti piccole macchie nere al microscopio, ma il terreno di coltura generalmente non è torbido. Dopo il passaggio delle cellule, sono apparse macchie nere intercellulari, le cellule sono state vacuolate e molte cellule assomigliavano all'apoptosi e alla necrosi. Alla fine, le cellule galleggiarono e morirono completamente.
Prevenzione della contaminazione cellulare
Stabilire buone regole e regolamenti può fare molto per ridurre la contaminazione cellulare. Compreso di sistema di accesso, norme operative e sistema di gestione quotidiana.
Sistema di accesso: comprensivo di personale e materiali. Il personale deve essere formato prima di poter operare da solo e deve soddisfare i requisiti di abbigliamento prima di entrare in laboratorio, come camici, camici isolanti, maschere, guanti, ecc. Per gli articoli necessari, gli articoli non usa e getta devono essere rigorosamente sterilizzati e sterilizzati e gli articoli acquistati devono essere acquistati da canali regolari e affidabili. Le cellule appena acquistate devono essere testate e verificate prima dell'uso.
Specifiche operative: è meglio formulare specifiche per le operazioni di routine e il personale di laboratorio deve seguire le specifiche operative, che non possono essere modificate a piacimento, e coltivare anche buone abitudini operative per il personale di laboratorio. Ad esempio, dopo che il puntale della pipetta è stato aspirato, non verrà esteso nel mezzo una seconda volta e una quantità sufficiente di mezzo verrà aspirata una volta. Quando si aggiunge il liquido, il liquido deve essere aggiunto in sospensione il più possibile, in modo da prevenire efficacemente la contaminazione da micoplasma e la contaminazione incrociata cellulare. Inoltre, se possibile, utilizzare solo una linea cellulare alla volta ed è meglio avere un piccolo intervallo di tempo tra le cellule per evitare la contaminazione incrociata.
Sistema di gestione giornaliero: include regole e metodi per l'uso, la pulizia e la manutenzione dell'ambiente e dei materiali di consumo, dei reagenti, ecc. Esistono anche la gestione del consumo, dell'inventario e dell'approvvigionamento di reagenti e materiali di consumo, inclusa la gestione dell'inventario a due livelli di campioni cellulari. Per le fonti di contaminazione che non sono facili da trovare, è meglio condurre test regolari, principalmente la contaminazione da micoplasmi e la contaminazione incrociata cellulare.
BKMAM Bio fornisce i materiali di consumo corrispondenti per la coltura cellulare:
Piastre Petri rotonde/quadrate monouso in plastica:
Materiale in polistirene ad alta trasparenza (PS);
La superficie è liscia e piatta e non vi è alcuna distorsione ottica delle cellule sotto osservazione al microscopio;
Il design impilabile semplifica l'impilaggio e lo stoccaggio;
Sterilizzazione con ossido di etilene (EO);
Resistenza all'usura e alla corrosione.
Trattamento aderente dei piatti di coltura cellulare:
Materiale in polistirene (PS);
Sterilizzazione a fascio di elettroni, senza pirogeni, senza tossine;
Trattamento superficiale al plasma sottovuoto, eccellente adesione cellulare;
La superficie è liscia e piatta e non vi è alcuna distorsione ottica delle cellule sotto osservazione al microscopio;
Il design impilabile facilita l'impilaggio e lo stoccaggio.
Piastre per colture cellulari in plastica:
Materiale in polistirene (PS);
Adatto per colture cellulari normali, tipo piastra di trattamento non aderente;
Nessun pirogeno, nessuna tossina, sterilizzato;
Imballaggio indipendente di tipo a strappo facile, facile da usare;
Trattamento aderente delle piastre di coltura cellulare:
Materiale in polistirene (PS);
Tipo di piastra per trattamento aderente (trattamento TC), adatta per la coltura di cellule aderenti;
Nessun pirogeno, nessuna tossina, sterilizzato;
Imballaggio indipendente di tipo a strappo facile, facile da usare;
Tutti sono fondi piatti.
Trattamento aderente dei flaconi di coltura cellulare:
Materiale in polistirene (PS);
Sterilizzazione a fascio di elettroni, senza pirogeni, senza tossine;
Trattamento superficiale al plasma sottovuoto, eccellente adesione cellulare;
Copertura traspirante, che favorisce lo scambio di gas e impedisce il passaggio di microrganismi.
Criovial di spin interno/esterno:
Materiale in polipropilene puro al 100% (PP);
Può resistere a 15 psi, sterilizzazione a 121 gradi;
La parete del tubo è ispessita e il corpo del tubo ha una scala e un'area di scrittura;
C'è una guarnizione ad anello in silicone tra la filettatura del coperchio del tubo e il corpo del tubo per garantire la tenuta;
Nessuna DNasi, nessuna RNasi, nessun pirogeno, nessuna endotossina.
