Come scegliere le giuste provette per PCR?
Risposta: Le provette PCR BKMAM sono adatte per strumenti PCR tradizionali e strumenti PCR in tempo reale sul mercato (strumenti PCR BD, Beckman e Wanshi).
Confronto tra PCR quantitativa in tempo reale, PCR digitale e PCR tradizionale:
Panoramica della PCR digitale: misurare la proporzione di replicati negativi per determinare il numero di copie assoluto.
Panoramica della PCR in tempo reale: le misurazioni vengono eseguite quando si verifica l'amplificazione della PCR.
Panoramica della PCR tradizionale: misurare la quantità di prodotto PCR accumulato alla fine del ciclo PCR.
La PCR digitale è quantitativa?
R: Sì, la proporzione di risposte RCR negative corrisponde all'algoritmo statistico di Poisson.
La PCR in tempo reale è quantitativa?
R: Sì, perché i dati vengono raccolti durante la fase esponenziale (logaritmica) della PCR, durante la quale la quantità di prodotto della PCR è proporzionale alla quantità di stampo di acido nucleico.
La PCR tradizionale è quantitativa?
R: No, ma confrontare l'intensità della banda amplificata sul gel con uno standard di concentrazione nota può darti un risultato "semiquantitativo".
Applicazioni della PCR digitale: quantificazione assoluta della carica virale, quantificazione assoluta degli standard di acido nucleico, quantificazione assoluta delle librerie di sequenziamento di nuova generazione, rilevamento di alleli rari, quantificazione assoluta dell'espressione genica, arricchimento e separazione di miscele
Applicazioni della PCR in tempo reale: quantificazione dell'espressione genica, validazione di microarray, controllo di qualità e validazione del saggio, rilevamento di patogeni
, Genotipizzazione SNP, variazione del numero di copie, analisi del microRNA, quantificazione del virus, esperimenti siRNA/RNAi
Applicazioni della PCR tradizionale: amplificazione del DNA, sequenziamento, genotipizzazione, clonazione molecolare
Conclusione: Vantaggi della PCR digitale: non c'è bisogno di fare affidamento su riferimenti o standard, la precisione desiderata può essere raggiunta aumentando il numero totale di repliche della PCR, elevata tolleranza agli inibitori, capacità di analizzare miscele complesse
A differenza della qPCR tradizionale, la PCR digitale risponde in modo lineare al numero di copie che emergono e possono essere rilevate piccole differenze di piegatura.
Vantaggi della PCR in tempo reale: aumento della gamma dinamica di rilevamento, nessuna elaborazione post-PCR richiesta, rilevamento in grado di coprire variazioni fino a 2- volte, acquisizione dati durante la fase esponenziale della PCR, aumento del segnale di fluorescenza del reporter con gli ampliconi risultanti In proporzione al numero, le sonde di clivaggio forniscono una registrazione permanente della scissione degli ampliconi
Svantaggi della PCR tradizionale: scarsa accuratezza, bassa sensibilità, piccolo range dinamico < 2 log, bassa risoluzione, non automazione, solo analisi differenziale basata su specifiche, risultati non rappresentati come numeri, quantificazione insufficiente mediante colorazione con bromuro di etidio, Post-PCR
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Michele Peng
Changde BKMAM Biotecnologia Co., Ltd
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